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本制品是来源于兔的抗磷酸化Erk1(Thr202/Tyr204)/Erk2(Thr185/Tyr187)蛋白单克隆抗体，配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测或其它适当用途时的一抗稀释。

• 建议抗体使用时的稀释比例如上表，实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整。

生长因子、激素和神经递质对信号转导通路的激活，是通过两种密切相关的促分裂原活化蛋白激酶（MAP激酶）——p44和p42介导的，这两种激酶分别被称为细胞外信号调节激酶1（ERK1）和细胞外信号调节激酶2（ERK2）。ERK蛋白的调控依赖于酪氨酸（Tyr）204、187残基以及苏氨酸（Thr）177、160残基的双重磷酸化，这些残基均位于特征性的Thr-Glu-Tyr（苏-谷-酪）基序内。ERK1的苏氨酸202、酪氨酸204残基，以及ERK2的苏氨酸185、酪氨酸187残基发生磷酸化，是其实现完全酶激活的必要条件。ERK2中双重磷酸化产生的结构效应包括：活性位点闭合、与ATP（三磷酸腺苷）相互作用的关键催化残基排列定位，以及激活环的构象重塑。激活后，MAP激酶会对下游组分的丝氨酸（Ser）和苏氨酸残基进行磷酸化修饰。MAP激酶的上游调节因子包括MAP激酶激酶（MEK）、MEK激酶以及Raf-1激酶。此外，ERK家族还包含另外三个成员：ERK3、ERK5和ERK6。

• 如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5～10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。
  
• 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1～3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
  
• 提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果，请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。

• Western检测：
  
  • 按照推荐的稀释比例用百奥莱博提供的Western一抗稀释液稀释抗体。
    
  • 把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜或室温缓慢摇动2小时，确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白膜。
    
  • 回收稀释的一抗，4℃保存以备下次继续使用。
    
  • 按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页：Western实验步骤及试剂
• 免疫染色：
  可以使用百奥莱博的免疫染色一抗稀释液(货号：YT088)稀释抗体，使用后注意回收稀释好的一抗，具体操作可以参考如下网页：免疫染色的方法与步骤
  
• 其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。